Javascript saat ini dinonaktifkan di browser Anda.Jika javascript dinonaktifkan, beberapa fungsi situs web ini tidak akan berfungsi.
Daftarkan detail spesifik Anda dan obat spesifik yang Anda minati, dan kami akan mencocokkan informasi yang Anda berikan dengan artikel di database ekstensif kami dan mengirimkan salinan PDF melalui email kepada Anda tepat waktu.
Apakah nanopartikel yang lebih kecil selalu lebih baik?Memahami efek biologis dari agregasi nanopartikel perak yang bergantung pada ukuran dalam kondisi yang relevan secara biologis
Penulis: Bélteky P, Rónavári A, Zakupszky D, Boka E, Igaz N, Szerencsés B, Pfeiffer I, Vágvölgyi C, Kiricsi M, Kónya Z
Péter Bélteky,1,* Andrea Rónavári,1,* Dalma Zakupszky,1 Eszter Boka,1 Nóra Igaz,2 Bettina Szerencsés,3 Ilona Pfeiffer,3 Csaba Vágvölgyi,3 Mónika Kiricsi dari Kimia Lingkungan, Hongaria, Hongaria Fakultas Sains dan Informatika , Universitas Szeged;2 Departemen Biokimia dan Biologi Molekuler, Fakultas Sains dan Informasi, Universitas Szeged, Hongaria;3 Departemen Mikrobiologi, Fakultas Sains dan Informasi, Universitas Szeged, Hongaria;Kelompok Penelitian Kinetika Reaksi dan Kimia Permukaan 4MTA-SZTE, Szeged, Hongaria* Para penulis memberikan kontribusi yang sama terhadap penelitian ini.Komunikasi: Zoltán Kónya Departemen Kimia Terapan dan Lingkungan, Fakultas Sains dan Informatika, Universitas Szeged, Rerrich Square 1, Szeged, H-6720, Hongaria Telepon +36 62 544620 Email [Perlindungan email] Tujuan: Nanopartikel perak (AgNPs) adalah salah satu bahan nano yang paling umum dipelajari, terutama karena aplikasi biomedisnya.Namun, karena agregasi nanopartikel, sitotoksisitas dan aktivitas antibakterinya yang sangat baik sering kali terganggu dalam media biologis.Dalam karya ini, perilaku agregasi dan aktivitas biologis terkait dari tiga sampel nanopartikel perak diakhiri sitrat dengan diameter rata-rata 10, 20, dan 50 nm dipelajari.Metode: Gunakan mikroskop elektron transmisi untuk mensintesis dan mengkarakterisasi nanopartikel, mengevaluasi perilaku agregasinya pada berbagai nilai pH, konsentrasi NaCl, glukosa dan glutamin dengan hamburan cahaya dinamis dan spektroskopi ultraviolet-tampak.Selain itu, dalam komponen media kultur sel seperti Dulbecco meningkatkan perilaku agregasi pada Medium Elang dan Serum Anak Sapi Janin.Hasil: Hasil penelitian menunjukkan bahwa pH asam dan kandungan elektrolit fisiologis umumnya menginduksi agregasi skala mikron, yang dapat dimediasi oleh pembentukan mahkota biomolekuler.Perlu dicatat bahwa partikel yang lebih besar menunjukkan ketahanan yang lebih tinggi terhadap pengaruh eksternal dibandingkan partikel yang lebih kecil.Uji sitotoksisitas dan antibakteri in vitro dilakukan dengan memperlakukan sel dengan agregat nanopartikel pada tahap agregasi yang berbeda.Kesimpulan: Hasil kami menunjukkan korelasi mendalam antara stabilitas koloid dan toksisitas AgNP, karena agregasi ekstrem menyebabkan hilangnya aktivitas biologis.Tingkat anti-agregasi yang lebih tinggi yang diamati untuk partikel yang lebih besar memiliki dampak yang signifikan terhadap toksisitas in vitro, karena sampel tersebut mempertahankan lebih banyak aktivitas antimikroba dan sel mamalia.Temuan ini mengarah pada kesimpulan bahwa, meskipun ada pendapat umum dalam literatur yang relevan, menargetkan nanopartikel sekecil mungkin mungkin bukan tindakan terbaik.Kata kunci: pertumbuhan yang dimediasi benih, stabilitas koloid, perilaku agregasi yang bergantung pada ukuran, toksisitas kerusakan agregasi
Ketika permintaan dan keluaran bahan nano terus meningkat, semakin banyak perhatian diberikan pada keamanan hayati atau aktivitas biologisnya.Nanopartikel perak (AgNPs) adalah salah satu perwakilan kelas material ini yang paling sering disintesis, diteliti, dan dimanfaatkan karena sifat katalitik, optik, dan biologisnya yang sangat baik.Secara umum diyakini bahwa karakteristik unik dari bahan nano (termasuk AgNP) terutama disebabkan oleh luas permukaan spesifiknya yang besar.Oleh karena itu, masalah yang pasti terjadi adalah setiap proses yang memengaruhi fitur utama ini, seperti ukuran partikel, lapisan permukaan, atau agregasi, apakah akan sangat merusak sifat nanopartikel yang penting untuk aplikasi tertentu.
Pengaruh ukuran partikel dan stabilisator merupakan subjek yang telah didokumentasikan dengan baik dalam literatur.Misalnya, pandangan yang diterima secara umum adalah bahwa nanopartikel yang lebih kecil lebih beracun dibandingkan nanopartikel yang lebih besar.2 Konsisten dengan literatur umum, penelitian kami sebelumnya telah menunjukkan aktivitas nanosilver yang bergantung pada ukuran pada sel mamalia dan mikroorganisme.3– 5 Lapisan permukaan adalah atribut lain yang memiliki pengaruh luas terhadap sifat bahan nano.Hanya dengan menambahkan atau memodifikasi zat penstabil pada permukaannya, bahan nano yang sama mungkin memiliki sifat fisik, kimia, dan biologi yang sangat berbeda.Penerapan agen capping paling sering dilakukan sebagai bagian dari sintesis nanopartikel.Misalnya, nanopartikel perak yang diakhiri sitrat adalah salah satu AgNP yang paling relevan dalam penelitian ini, yang disintesis dengan mereduksi garam perak dalam larutan penstabil yang dipilih sebagai media reaksi.6 Sitrat dapat dengan mudah memanfaatkan biayanya yang rendah, ketersediaannya, biokompatibilitasnya, dan afinitasnya yang kuat terhadap perak, yang dapat tercermin dalam berbagai interaksi yang diusulkan, mulai dari adsorpsi permukaan yang dapat dibalik hingga interaksi ionik.Molekul kecil dan ion poliatomik mendekati 7,8, seperti sitrat, polimer, polielektrolit, dan agen biologis juga biasanya digunakan untuk menstabilkan nano-perak dan melakukan fungsionalisasi unik di dalamnya.9-12
Meskipun kemungkinan mengubah aktivitas nanopartikel dengan pembatasan permukaan yang disengaja adalah bidang yang sangat menarik, peran utama pelapisan permukaan ini dapat diabaikan, karena memberikan stabilitas koloid untuk sistem nanopartikel.Luas permukaan spesifik material nano yang besar akan menghasilkan energi permukaan yang besar, sehingga menghambat kemampuan termodinamika sistem untuk mencapai energi minimumnya.13 Tanpa stabilisasi yang tepat, hal ini dapat menyebabkan aglomerasi material nano.Agregasi adalah pembentukan agregat partikel-partikel dengan berbagai bentuk dan ukuran yang terjadi ketika partikel-partikel terdispersi bertemu dan interaksi termodinamika saat ini memungkinkan partikel-partikel tersebut saling menempel.Oleh karena itu, stabilisator digunakan untuk mencegah agregasi dengan memberikan gaya tolak menolak yang cukup besar antar partikel untuk melawan tarikan termodinamikanya.14
Meskipun subjek ukuran partikel dan cakupan permukaan telah dieksplorasi secara menyeluruh dalam konteks pengaturan aktivitas biologis yang dipicu oleh nanopartikel, agregasi partikel masih merupakan bidang yang terabaikan.Hampir tidak ada penelitian menyeluruh untuk memecahkan stabilitas koloid nanopartikel dalam kondisi yang relevan secara biologis.10,15-17 Selain itu, kontribusi ini sangat jarang terjadi, dimana toksisitas yang terkait dengan agregasi juga telah dipelajari, bahkan jika hal tersebut dapat menyebabkan reaksi merugikan, seperti trombosis vaskular, atau hilangnya karakteristik yang diinginkan, seperti toksisitasnya, seperti ditunjukkan pada Gambar 1.18, 19 ditunjukkan.Faktanya, salah satu dari sedikit mekanisme resistensi nanopartikel perak yang diketahui terkait dengan agregasi, karena strain E. coli dan Pseudomonas aeruginosa tertentu dilaporkan mengurangi sensitivitas nano-perak dengan mengekspresikan protein flagellin, flagellin.Ia memiliki afinitas yang tinggi terhadap perak, sehingga menyebabkan agregasi.20
Ada beberapa mekanisme berbeda yang terkait dengan toksisitas nanopartikel perak, dan agregasi mempengaruhi semua mekanisme ini.Metode aktivitas biologis AgNP yang paling banyak dibicarakan, kadang-kadang disebut sebagai mekanisme “Kuda Troya”, menganggap AgNP sebagai pembawa Ag+.1,21 Mekanisme kuda Trojan dapat memastikan peningkatan besar dalam konsentrasi Ag+ lokal, yang mengarah pada pembentukan ROS dan depolarisasi membran.22-24 Agregasi dapat mempengaruhi pelepasan Ag+, sehingga mempengaruhi toksisitas, karena mengurangi permukaan aktif efektif dimana ion perak dapat teroksidasi dan larut.Namun, AgNP tidak hanya menunjukkan toksisitas melalui pelepasan ion.Banyak interaksi terkait ukuran dan morfologi yang harus dipertimbangkan.Diantaranya, ukuran dan bentuk permukaan nanopartikel merupakan karakteristik yang menentukan.4,25 Kumpulan mekanisme ini dapat dikategorikan sebagai “mekanisme toksisitas yang diinduksi.”Ada banyak potensi reaksi mitokondria dan membran permukaan yang dapat merusak organel dan menyebabkan kematian sel.25-27 Karena pembentukan agregat secara alami mempengaruhi ukuran dan bentuk benda-benda yang mengandung perak yang dikenali oleh sistem kehidupan, maka interaksi ini juga dapat terpengaruh.
Dalam makalah kami sebelumnya tentang agregasi nanopartikel perak, kami mendemonstrasikan prosedur penyaringan efektif yang terdiri dari eksperimen kimia dan biologi in vitro untuk mempelajari masalah ini.19 Hamburan Cahaya Dinamis (DLS) adalah teknik yang disukai untuk jenis inspeksi ini karena material dapat menghamburkan foton pada panjang gelombang yang sebanding dengan ukuran partikelnya.Karena kecepatan gerak Brown partikel dalam media cair berhubungan dengan ukuran, perubahan intensitas cahaya yang tersebar dapat digunakan untuk menentukan diameter hidrodinamik rata-rata (rata-rata Z) sampel cairan.28 Selain itu, dengan memberikan tegangan pada sampel, potensial zeta (potensial ζ) nanopartikel dapat diukur serupa dengan nilai rata-rata Z.13,28 Jika nilai absolut potensial zeta cukup tinggi (menurut pedoman umum > ±30 mV), maka akan timbul tolakan elektrostatis yang kuat antar partikel untuk melawan agregasi.Resonansi plasmon permukaan karakteristik (SPR) adalah fenomena optik unik, terutama disebabkan oleh nanopartikel logam mulia (terutama Au dan Ag).29​​ Berdasarkan osilasi elektronik (plasmon permukaan) material tersebut pada skala nano, diketahui bahwa AgNP berbentuk bola memiliki karakteristik puncak serapan UV-Vis mendekati 400 nm.30 Intensitas dan pergeseran panjang gelombang partikel digunakan untuk melengkapi hasil DLS, karena metode ini dapat digunakan untuk mendeteksi agregasi nanopartikel dan adsorpsi permukaan biomolekul.
Berdasarkan informasi yang diperoleh, uji viabilitas sel (MTT) dan antibakteri dilakukan dengan cara di mana toksisitas AgNP digambarkan sebagai fungsi tingkat agregasi, bukan konsentrasi nanopartikel (faktor yang paling umum digunakan).Metode unik ini memungkinkan kami untuk menunjukkan pentingnya tingkat agregasi dalam aktivitas biologis, karena, misalnya, AgNP yang diakhiri dengan sitrat benar-benar kehilangan aktivitas biologisnya dalam beberapa jam karena agregasi.19
Dalam penelitian ini, kami bertujuan untuk memperluas kontribusi kami sebelumnya dalam stabilitas koloid terkait bio dan dampaknya terhadap aktivitas biologis dengan mempelajari pengaruh ukuran nanopartikel pada agregasi nanopartikel.Tidak diragukan lagi ini adalah salah satu studi tentang nanopartikel.Perspektif yang lebih luas dan 31 Untuk menyelidiki masalah ini, metode pertumbuhan yang dimediasi benih digunakan untuk menghasilkan AgNP yang diakhiri sitrat dalam tiga rentang ukuran berbeda (10, 20, dan 50 nm).6,32 sebagai salah satu metode yang paling umum.Untuk bahan nano yang banyak dan rutin digunakan dalam aplikasi medis, AgNP yang diakhiri dengan sitrat dengan ukuran berbeda dipilih untuk mempelajari kemungkinan ketergantungan ukuran dari sifat biologis terkait agregasi nanosilver.Setelah mensintesis AgNP dengan ukuran berbeda, kami mengkarakterisasi sampel yang dihasilkan dengan mikroskop elektron transmisi (TEM), dan kemudian memeriksa partikel menggunakan prosedur penyaringan yang disebutkan di atas.Selain itu, dengan adanya kultur sel in vitro Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) dan Fetal Bovine Serum (FBS), perilaku agregasi yang bergantung pada ukuran dan perilakunya dievaluasi pada berbagai nilai pH, NaCl, glukosa, dan konsentrasi glutamin.Karakteristik sitotoksisitas ditentukan dalam kondisi yang kompleks.Konsensus ilmiah menunjukkan bahwa secara umum, partikel yang lebih kecil lebih disukai;penyelidikan kami menyediakan landasan kimia dan biologis untuk menentukan apakah hal ini memang terjadi.
Tiga nanopartikel perak dengan rentang ukuran berbeda dibuat dengan metode pertumbuhan yang dimediasi benih yang diusulkan oleh Wan et al., dengan sedikit penyesuaian.6 Metode ini didasarkan pada reduksi kimia, menggunakan perak nitrat (AgNO3) sebagai sumber perak, natrium borohidrida (NaBH4) sebagai zat pereduksi, dan natrium sitrat sebagai penstabil.Pertama, siapkan 75 mL larutan berair 9 mM sitrat dari natrium sitrat dihidrat (Na3C6H5O7 x 2H2O) dan panaskan hingga 70°C.Kemudian, 2 mL larutan AgNO3 1% b/v ditambahkan ke dalam media reaksi, dan kemudian larutan natrium borohidrida yang baru disiapkan (2 mL 0,1% b/v) dituangkan ke dalam campuran secara tetes demi tetes.Suspensi kuning-coklat yang dihasilkan disimpan pada suhu 70°C sambil diaduk kuat selama 1 jam, kemudian didinginkan hingga suhu kamar.Sampel yang dihasilkan (selanjutnya disebut sebagai AgNP-I) digunakan sebagai dasar untuk pertumbuhan yang dimediasi benih pada langkah sintesis berikutnya.
Untuk mensintesis suspensi partikel berukuran sedang (dilambangkan sebagai AgNP-II), panaskan 90 mL larutan sitrat 7,6 mM hingga 80°C, campur dengan 10 mL AgNP-I, lalu campurkan 2 mL 1% b/v larutan AgNO3 disimpan di bawah pengadukan mekanis yang kuat selama 1 jam, dan kemudian sampel didinginkan hingga suhu kamar.
Untuk partikel terbesar (AgNP-III), ulangi proses pertumbuhan yang sama, namun dalam kasus ini, gunakan 10 mL AgNP-II sebagai suspensi benih.Setelah sampel mencapai suhu kamar, mereka menetapkan konsentrasi Ag nominal berdasarkan kandungan total AgNO3 menjadi 150 ppm dengan menambahkan atau menguapkan pelarut tambahan pada suhu 40°C, dan terakhir menyimpannya pada suhu 4°C hingga digunakan lebih lanjut.
Gunakan FEI Tecnai G2 20 X-Twin Transmission Electron Microscope (TEM) (FEI Corporate Headquarters, Hillsboro, Oregon, USA) dengan tegangan percepatan 200 kV untuk memeriksa karakteristik morfologi nanopartikel dan menangkap pola difraksi elektron (ED).Setidaknya 15 gambar representatif (~750 partikel) dievaluasi menggunakan paket perangkat lunak ImageJ, dan histogram yang dihasilkan (dan semua grafik dalam keseluruhan penelitian) dibuat di OriginPro 2018 (OriginLab, Northampton, MA, USA) 33, 34.
Diameter hidrodinamik rata-rata (rata-rata Z), potensial zeta (potensial ζ) dan karakteristik resonansi plasmon permukaan (SPR) sampel diukur untuk menggambarkan sifat koloid awalnya.Rata-rata diameter hidrodinamik dan potensial zeta sampel diukur dengan instrumen Malvern Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments, Malvern, UK) menggunakan sel kapiler terlipat sekali pakai pada suhu 37±0,1°C.Spektrofotometer UV-Vis Ocean Optics 355 DH-2000-BAL (Halma PLC, Largo, FL, USA) digunakan untuk mendapatkan karakteristik SPR dari spektrum serapan UV-Vis sampel pada kisaran 250-800 nm.
Selama keseluruhan percobaan, tiga jenis pengukuran berbeda terkait stabilitas koloid dilakukan pada waktu yang bersamaan.Gunakan DLS untuk mengukur rata-rata diameter hidrodinamik (rata-rata Z) dan potensial zeta (potensial ζ) partikel, karena rata-rata Z berkaitan dengan ukuran rata-rata agregat nanopartikel, dan potensial zeta menunjukkan apakah terdapat tolakan elektrostatis dalam sistem. cukup kuat untuk mengimbangi gaya tarik Van der Waals antar nanopartikel.Pengukuran dilakukan rangkap tiga, dan deviasi standar mean Z dan potensial zeta dihitung dengan perangkat lunak Zetasizer.Spektrum SPR karakteristik partikel dievaluasi dengan spektroskopi UV-Vis, karena perubahan intensitas puncak dan panjang gelombang dapat mengindikasikan agregasi dan interaksi permukaan.Faktanya, resonansi plasmon permukaan pada logam mulia sangat berpengaruh sehingga memunculkan metode baru dalam analisis biomolekul.29,36,37 Konsentrasi AgNP dalam campuran percobaan adalah sekitar 10 ppm, dan tujuannya adalah untuk mengatur intensitas serapan SPR awal maksimum menjadi 1. Percobaan dilakukan dengan cara bergantung waktu pada 0;1,5;3;6;12 dan 24 jam dalam berbagai kondisi biologis yang relevan.Penjelasan lebih rinci mengenai percobaan dapat dilihat pada karya kami sebelumnya.19 Singkatnya, berbagai nilai pH (3; 5; 7.2 dan 9), konsentrasi natrium klorida (10 mM; 50 mM; 150 mM), glukosa (3,9 mM; 6,7 mM) dan glutamin (4 mM) yang berbeda, dan juga menyiapkan Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) dan Fetal Bovine Serum (FBS) (dalam air dan DMEM) sebagai sistem model, dan mempelajari pengaruhnya terhadap perilaku agregasi nanopartikel perak yang disintesis.pH Nilai NaCl, glukosa, dan glutamin dievaluasi berdasarkan konsentrasi fisiologis, sedangkan jumlah DMEM dan FBS sama dengan kadar yang digunakan pada keseluruhan percobaan in vitro.38-42 Semua pengukuran dilakukan pada pH 7,2 dan 37°C dengan konsentrasi garam latar belakang konstan sebesar 10 mM NaCl untuk menghilangkan interaksi partikel jarak jauh (kecuali untuk eksperimen terkait pH dan NaCl tertentu, di mana atribut ini adalah variabel di bawah belajar).28 Daftar berbagai kondisi dirangkum dalam Tabel 1. Eksperimen yang ditandai dengan † digunakan sebagai referensi dan sesuai dengan sampel yang mengandung 10 mM NaCl dan pH 7,2.
Garis sel kanker prostat manusia (DU145) dan keratinosit manusia yang diabadikan (HaCaT) diperoleh dari ATCC (Manassas, VA, USA).Sel secara rutin dikultur dalam medium esensial minimum Dulbecco Eagle (DMEM) yang mengandung 4,5 g/L glukosa (Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO, USA), ditambah dengan 10% FBS, 2 mM L-glutamin, 0,01% Streptomisin, dan 0,005% Penisilin (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, AS).Sel-sel dikultur dalam inkubator 37°C dengan 5% CO2 dan kelembapan 95%.
Untuk mengeksplorasi perubahan sitotoksisitas AgNP yang disebabkan oleh agregasi partikel yang bergantung pada waktu, dilakukan uji MTT dua langkah.Pertama, viabilitas kedua jenis sel diukur setelah pengobatan dengan AgNP-I, AgNP-II dan AgNP-III.Untuk tujuan ini, kedua jenis sel tersebut diunggulkan ke dalam pelat 96 sumur dengan kepadatan 10.000 sel/sumur dan diolah dengan tiga ukuran nanopartikel perak yang berbeda dalam peningkatan konsentrasi pada hari kedua.Setelah 24 jam pengobatan, sel dicuci dengan PBS dan diinkubasi dengan reagen MTT 0,5 mg/mL (SERVA, Heidelberg, Jerman) yang diencerkan dalam media kultur selama 1 jam pada suhu 37°C.Kristal formazan dilarutkan dalam DMSO (Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO, USA), dan penyerapan diukur pada 570 nm menggunakan pembaca pelat Synergy HTX (BioTek-Hungary, Budapest, Hongaria).Nilai penyerapan sampel kontrol yang tidak diberi perlakuan dianggap tingkat kelangsungan hidup 100%.Lakukan setidaknya 3 percobaan menggunakan empat ulangan biologis independen.IC50 dihitung dari kurva respon dosis berdasarkan hasil vitalitas.
Setelah itu, pada langkah kedua, dengan menginkubasi partikel dengan 150 mM NaCl untuk periode waktu yang berbeda (0, 1,5, 3, 6, 12, dan 24 jam) sebelum perlakuan sel, dihasilkan keadaan agregasi nanopartikel perak yang berbeda.Selanjutnya, uji MTT yang sama dilakukan seperti dijelaskan sebelumnya untuk mengevaluasi perubahan viabilitas sel yang dipengaruhi oleh agregasi partikel.Gunakan GraphPad Prism 7 untuk mengevaluasi hasil akhir, hitung signifikansi statistik eksperimen dengan uji-t tidak berpasangan, dan tandai levelnya sebagai * (p ≤ 0,05), ** (p ≤ 0,01), *** (p ≤ 0,001 ) Dan **** (p ≤ 0,0001).
Tiga ukuran nanopartikel perak yang berbeda (AgNP-I, AgNP-II dan AgNP-III) digunakan untuk kerentanan antibakteri terhadap Cryptococcus neoformans IFM 5844 (IFM; Pusat Penelitian Jamur Patogen dan Toksikologi Mikroba, Universitas Chiba) dan Uji Bacillus megaterium SZMC 6031 (SZMC: Szeged Microbiology Collection) dan E. coli SZMC 0582 dalam medium RPMI 1640 (Sigma-Aldrich Co.).Untuk mengevaluasi perubahan aktivitas antibakteri yang disebabkan oleh agregasi partikel, pertama-tama, konsentrasi hambat minimum (MIC) ditentukan dengan mikrodilusi dalam pelat mikrotiter 96 sumur.Ke dalam 50 μL suspensi sel standar (5 × 104 sel/mL dalam medium RPMI 1640), tambahkan 50 μL suspensi nanopartikel perak dan encerkan secara berurutan dua kali konsentrasinya (dalam medium tersebut, kisarannya adalah 0 dan 75 ppm, Artinya, sampel kontrol mengandung 50 μL suspensi sel dan 50 μL medium tanpa nanopartikel).Setelah itu, pelat diinkubasi pada suhu 30°C selama 48 jam, dan kepadatan optik kultur diukur pada 620 nm menggunakan pembaca pelat SPECTROstar Nano (BMG LabTech, Offenburg, Jerman).Percobaan dilakukan sebanyak tiga kali rangkap tiga.
Kecuali bahwa 50 μL sampel nanopartikel agregat tunggal digunakan pada saat ini, prosedur yang sama seperti yang dijelaskan sebelumnya digunakan untuk menguji efek agregasi pada aktivitas antibakteri pada strain yang disebutkan di atas.Keadaan agregasi nanopartikel perak yang berbeda dihasilkan dengan menginkubasi partikel dengan 150 mM NaCl untuk periode waktu yang berbeda (0, 1,5, 3, 6, 12, dan 24 jam) sebelum pemrosesan sel.Suspensi yang ditambah dengan 50 μL media RPMI 1640 digunakan sebagai kontrol pertumbuhan, sedangkan untuk mengendalikan toksisitas, suspensi dengan nanopartikel non-agregat digunakan.Percobaan dilakukan sebanyak tiga kali rangkap tiga.Gunakan GraphPad Prism 7 untuk mengevaluasi kembali hasil akhir, menggunakan analisis statistik yang sama seperti analisis MTT.
Tingkat agregasi partikel terkecil (AgNP-I) telah dikarakterisasi, dan hasilnya sebagian dipublikasikan dalam penelitian kami sebelumnya, namun untuk perbandingan yang lebih baik, semua partikel disaring secara menyeluruh.Data eksperimen dikumpulkan dan dibahas di bagian berikut.Tiga ukuran AgNP.19
Pengukuran yang dilakukan oleh TEM, UV-Vis dan DLS memverifikasi keberhasilan sintesis semua sampel AgNP (Gambar 2A-D).Menurut baris pertama Gambar 2, partikel terkecil (AgNP-I) menunjukkan morfologi bola seragam dengan diameter rata-rata sekitar 10 nm.Metode pertumbuhan yang dimediasi benih juga memberikan AgNP-II dan AgNP-III dengan rentang ukuran berbeda dengan diameter partikel rata-rata masing-masing sekitar 20 nm dan 50 nm.Menurut deviasi standar distribusi partikel, ukuran ketiga sampel tidak tumpang tindih, yang penting untuk analisis komparatifnya.Dengan membandingkan rasio aspek rata-rata dan rasio ketipisan proyeksi 2D partikel berbasis TEM, diasumsikan bahwa kebulatan partikel dievaluasi dengan plug-in filter bentuk ImageJ (Gambar 2E).43 Menurut analisis bentuk partikel, rasio aspeknya (sisi besar/sisi pendek dari persegi panjang pembatas terkecil) tidak dipengaruhi oleh pertumbuhan partikel, dan rasio ketipisannya (luas diukur dari lingkaran sempurna/luas teoretis yang sesuai ) secara bertahap menurun.Hal ini menghasilkan semakin banyak partikel polihedral, yang secara teori berbentuk bulat sempurna, sesuai dengan rasio ketipisan 1.
Gambar 2 Gambar mikroskop elektron transmisi (TEM) (A), pola difraksi elektron (ED) (B), histogram distribusi ukuran (C), spektrum serapan cahaya ultraviolet-visibel (UV-Vis) karakteristik (D), dan rata-rata cairan Sitrat -nanopartikel perak terminasi dengan diameter mekanis (rata-rata Z), potensial zeta, rasio aspek, dan rasio ketebalan (E) memiliki tiga rentang ukuran berbeda: AgNP-I adalah 10 nm (baris atas), AgNP -II adalah 20 nm (baris tengah ), AgNP-III (baris bawah) adalah 50 nm.
Meskipun sifat siklik dari metode pertumbuhan mempengaruhi bentuk partikel sampai batas tertentu, sehingga menghasilkan kebulatan yang lebih kecil dari AgNP yang lebih besar, ketiga sampel tetap berbentuk kuasi-bola.Selain itu, seperti yang ditunjukkan pada pola difraksi elektron pada Gambar 2B, nano Kristalinitas partikel tidak terpengaruh.Cincin difraksi yang menonjol—yang dapat dikorelasikan dengan (111), (220), (200), dan (311) indeks perak Miller—sangat konsisten dengan literatur ilmiah dan kontribusi kami sebelumnya.9, 19,44 Fragmentasi cincin Debye-Scherrer AgNP-II dan AgNP-III disebabkan oleh fakta bahwa gambar ED ditangkap pada perbesaran yang sama, sehingga dengan bertambahnya ukuran partikel, jumlah partikel yang terdifraksi per satuan luas bertambah dan berkurang.
Ukuran dan bentuk nanopartikel diketahui mempengaruhi aktivitas biologis.3,45 Aktivitas katalitik dan biologis yang bergantung pada bentuk dapat dijelaskan oleh fakta bahwa bentuk yang berbeda cenderung memperbanyak permukaan kristal tertentu (memiliki indeks Miller yang berbeda), dan permukaan kristal ini memiliki aktivitas yang berbeda.45,46 Karena partikel yang disiapkan memberikan hasil ED yang serupa sesuai dengan karakteristik kristal yang sangat mirip, dapat diasumsikan bahwa dalam percobaan stabilitas koloid dan aktivitas biologis berikutnya, setiap perbedaan yang diamati harus dikaitkan dengan ukuran nanopartikel, bukan sifat yang berhubungan dengan bentuk.
Hasil UV-Vis yang dirangkum dalam Gambar 2D lebih jauh menekankan sifat bola yang luar biasa dari AgNP yang disintesis, karena puncak SPR dari ketiga sampel adalah sekitar 400 nm, yang merupakan nilai karakteristik nanopartikel perak berbentuk bola.29,30 Spektrum yang ditangkap juga mengkonfirmasi keberhasilan pertumbuhan nanosilver yang dimediasi benih.Dengan bertambahnya ukuran partikel, panjang gelombang yang sesuai dengan penyerapan cahaya maksimum AgNP-II-lebih jelas-Menurut literatur, AgNP-III Mengalami pergeseran merah.6,29
Mengenai stabilitas koloid awal sistem AgNP, DLS digunakan untuk mengukur rata-rata diameter hidrodinamik dan potensial zeta partikel pada pH 7,2.Hasil yang digambarkan pada Gambar 2E menunjukkan bahwa AgNP-III memiliki stabilitas koloid yang lebih tinggi dibandingkan AgNP-I atau AgNP-II, karena pedoman umum menunjukkan bahwa potensi zeta sebesar 30 mV absolut diperlukan untuk stabilitas koloid jangka panjang. Temuan ini semakin didukung ketika nilai rata-rata Z (diperoleh sebagai rata-rata diameter hidrodinamik partikel bebas dan agregat) dibandingkan dengan ukuran partikel primer yang diperoleh TEM, karena semakin dekat kedua nilai tersebut maka semakin ringan derajatnya.Faktanya, rata-rata Z dari AgNP-I dan AgNP-II cukup tinggi dibandingkan ukuran partikel utamanya yang dievaluasi oleh TEM, sehingga dibandingkan dengan AgNP-III, sampel-sampel ini diperkirakan lebih cenderung beragregasi, dimana potensi zeta yang sangat negatif disertai dengan ukuran yang mendekati nilai rata-rata Z.
Penjelasan atas fenomena ini ada dua.Di satu sisi, konsentrasi sitrat dipertahankan pada tingkat yang sama di semua tahap sintesis, menyediakan jumlah kelompok permukaan bermuatan yang relatif tinggi untuk mencegah penurunan luas permukaan spesifik partikel yang tumbuh.Namun menurut Levak et al., molekul kecil seperti sitrat dapat dengan mudah ditukar oleh biomolekul pada permukaan nanopartikel.Dalam hal ini stabilitas koloid akan ditentukan oleh mahkota biomolekul yang dihasilkan.31 Karena perilaku ini juga diamati dalam pengukuran agregasi kami (dibahas secara lebih rinci nanti), pembatasan sitrat saja tidak dapat menjelaskan fenomena ini.
Di sisi lain, ukuran partikel berbanding terbalik dengan kecenderungan agregasi pada tingkat nanometer.Hal ini terutama didukung oleh metode tradisional Derjaguin-Landau-Verwey-Overbeek (DLVO), di mana tarikan partikel digambarkan sebagai jumlah gaya tarik menarik dan tolak menolak antar partikel.Menurut He et al., nilai maksimum kurva energi DLVO menurun seiring dengan ukuran nanopartikel dalam nanopartikel hematit, sehingga lebih mudah untuk mencapai energi primer minimum, sehingga mendorong agregasi ireversibel (kondensasi).47 Namun, ada spekulasi bahwa ada aspek lain di luar batasan teori DLVO.Meskipun gravitasi van der Waals dan tolakan lapisan ganda elektrostatis serupa dengan meningkatnya ukuran partikel, tinjauan oleh Hotze dkk.mengusulkan bahwa hal ini memiliki efek yang lebih kuat pada agregasi daripada yang dimungkinkan oleh DLVO.14 Mereka percaya bahwa kelengkungan permukaan nanopartikel tidak lagi dapat diperkirakan sebagai permukaan datar, sehingga estimasi matematis tidak dapat diterapkan.Selain itu, seiring dengan mengecilnya ukuran partikel, persentase atom yang ada di permukaan menjadi lebih tinggi, sehingga menyebabkan struktur elektronik dan perilaku muatan permukaan.Dan perubahan reaktivitas permukaan, yang dapat menyebabkan penurunan muatan pada lapisan ganda listrik dan mendorong agregasi.
Ketika membandingkan hasil DLS AgNP-I, AgNP-II, dan AgNP-III pada Gambar 3, kami mengamati bahwa ketiga sampel menunjukkan pH serupa yang mendorong agregasi.Lingkungan yang sangat asam (pH 3) menggeser potensial zeta sampel menjadi 0 mV, menyebabkan partikel membentuk agregat berukuran mikron, sedangkan pH basa menggeser potensial zeta sampel ke nilai negatif yang lebih besar, dimana partikel membentuk agregat yang lebih kecil (pH 5 ).Dan 7.2) ), atau tetap tidak teragregasi sama sekali (pH 9).Beberapa perbedaan penting antara sampel yang berbeda juga diamati.Sepanjang percobaan, AgNP-I terbukti paling sensitif terhadap perubahan potensial zeta yang diinduksi pH, karena potensial zeta partikel tersebut telah berkurang pada pH 7,2 dibandingkan dengan pH 9, sedangkan AgNP-II dan AgNP-III hanya menunjukkan A. perubahan besar pada ζ adalah sekitar pH 3. Selain itu, AgNP-II menunjukkan perubahan yang lebih lambat dan potensi zeta yang moderat, sedangkan AgNP-III menunjukkan perilaku paling ringan dari ketiganya, karena sistem menunjukkan nilai zeta absolut tertinggi dan pergerakan tren yang lambat, menunjukkan AgNP-III Paling tahan terhadap agregasi yang disebabkan oleh pH.Hasil ini sesuai dengan hasil pengukuran diameter hidrodinamik rata-rata.Mengingat ukuran partikel primernya, AgNP-I menunjukkan agregasi bertahap yang konstan pada semua nilai pH, kemungkinan besar karena latar belakang NaCl 10 mM, sedangkan AgNP-II dan AgNP-III hanya menunjukkan signifikansi pada pH 3 pengumpulan.Perbedaan yang paling menarik adalah meskipun ukuran nanopartikelnya besar, AgNP-III membentuk agregat terkecil pada pH 3 dalam 24 jam, sehingga menonjolkan sifat anti-agregasinya.Dengan membagi rata-rata Z AgNP pada pH 3 setelah 24 jam dengan nilai sampel yang disiapkan, dapat diamati bahwa ukuran agregat relatif AgNP-I dan AgNP-II meningkat sebesar 50 kali lipat, 42 kali lipat, dan 22 kali lipat. , masing-masing.AKU AKU AKU.
Gambar 3 Hasil hamburan cahaya dinamis sampel nanopartikel perak diakhiri sitrat dengan ukuran yang semakin meningkat (10 nm: AgNP-I, 20 nm: AgNP-II dan 50 nm: AgNP-III) dinyatakan sebagai rata-rata diameter hidrodinamik (Z rata-rata ) (kanan) Dalam kondisi pH yang berbeda, potensial zeta (kiri) berubah dalam waktu 24 jam.
Agregasi bergantung pada pH yang diamati juga mempengaruhi karakteristik resonansi plasmon permukaan (SPR) sampel AgNP, sebagaimana dibuktikan oleh spektrum UV-Vis.Menurut Gambar Tambahan S1, agregasi ketiga suspensi nanopartikel perak diikuti oleh penurunan intensitas puncak SPR dan pergeseran merah sedang.Tingkat perubahan ini sebagai fungsi pH konsisten dengan tingkat agregasi yang diprediksi oleh hasil DLS, namun beberapa tren menarik telah diamati.Bertentangan dengan intuisi, ternyata AgNP-II berukuran sedang paling sensitif terhadap perubahan SPR, sedangkan dua sampel lainnya kurang sensitif.Dalam penelitian SPR, 50 nm merupakan batas ukuran partikel teoritis yang digunakan untuk membedakan partikel berdasarkan sifat dielektriknya.Partikel yang lebih kecil dari 50 nm (AgNP-I dan AgNP-II) dapat digambarkan sebagai dipol dielektrik sederhana, sedangkan partikel yang mencapai atau melampaui batas ini (AgNP-III) memiliki sifat dielektrik yang lebih kompleks, dan pita resonansinya terpecah menjadi perubahan multimodal .Dalam kasus dua sampel partikel yang lebih kecil, AgNP dapat dianggap sebagai dipol sederhana, dan plasma dapat dengan mudah tumpang tindih.Ketika ukuran partikel meningkat, penggandengan ini pada dasarnya menghasilkan plasma yang lebih besar, yang mungkin menjelaskan sensitivitas yang lebih tinggi yang diamati.29 Namun, untuk partikel terbesar, estimasi dipol sederhana tidak valid ketika keadaan penggandengan lainnya juga mungkin terjadi, yang dapat menjelaskan kecenderungan penurunan AgNP-III untuk menunjukkan perubahan spektral.29
Dalam kondisi eksperimental kami, terbukti bahwa nilai pH memiliki pengaruh besar terhadap stabilitas koloid nanopartikel perak berlapis sitrat dengan berbagai ukuran.Dalam sistem ini, stabilitas disediakan oleh gugus -COO- yang bermuatan negatif pada permukaan AgNP.Gugus fungsi karboksilat pada ion sitrat terprotonasi dalam sejumlah besar ion H+, sehingga gugus karboksil yang dihasilkan tidak dapat lagi memberikan gaya tolak elektrostatik antar partikel, seperti terlihat pada baris atas Gambar 4. Menurut prinsip Le Chatelier, AgNP sampel dengan cepat berkumpul pada pH 3, tetapi secara bertahap menjadi lebih stabil seiring dengan peningkatan pH.
Gambar 4 Mekanisme skema interaksi permukaan ditentukan oleh agregasi pada pH yang berbeda (baris atas), konsentrasi NaCl (baris tengah), dan biomolekul (baris bawah).
Menurut Gambar 5, stabilitas koloid dalam suspensi AgNP dengan ukuran berbeda juga diperiksa dengan meningkatnya konsentrasi garam.Berdasarkan potensi zeta, peningkatan ukuran nanopartikel dalam sistem AgNP yang diakhiri dengan sitrat ini kembali memberikan peningkatan resistensi terhadap pengaruh eksternal dari NaCl.Dalam AgNP-I, 10 mM NaCl cukup untuk menginduksi agregasi ringan, dan konsentrasi garam 50 mM memberikan hasil yang sangat mirip.Pada AgNP-II dan AgNP-III, NaCl 10 mM tidak berpengaruh nyata terhadap potensial zeta karena nilainya tetap pada (AgNP-II) atau di bawah (AgNP-III) -30 mV.Meningkatkan konsentrasi NaCl hingga 50 mM dan akhirnya hingga 150 mM NaCl sudah cukup untuk secara signifikan mengurangi nilai absolut potensial zeta di semua sampel, meskipun partikel yang lebih besar mempertahankan lebih banyak muatan negatif.Hasil ini konsisten dengan diameter hidrodinamik rata-rata AgNP yang diharapkan;garis tren rata-rata Z yang diukur pada NaCl 10, 50, dan 150 mM menunjukkan nilai yang berbeda dan meningkat secara bertahap.Akhirnya, agregat berukuran mikron terdeteksi dalam ketiga percobaan 150 mM.
Gambar 5 Hasil hamburan cahaya dinamis sampel nanopartikel perak diakhiri sitrat dengan ukuran yang semakin meningkat (10 nm: AgNP-I, 20 nm: AgNP-II dan 50 nm: AgNP-III) dinyatakan sebagai rata-rata diameter hidrodinamik (Z rata-rata ) (kanan) dan potensial zeta (kiri) berubah dalam waktu 24 jam pada konsentrasi NaCl yang berbeda.
Hasil UV-Vis pada Gambar Tambahan S2 menunjukkan bahwa SPR 50 dan 150 mM NaCl pada ketiga sampel mengalami penurunan seketika dan signifikan.Hal ini dapat dijelaskan dengan DLS, karena agregasi berbasis NaCl terjadi lebih cepat dibandingkan eksperimen yang bergantung pada pH, yang dijelaskan oleh perbedaan besar antara pengukuran awal (0, 1,5, dan 3 jam).Selain itu, peningkatan konsentrasi garam juga akan meningkatkan permitivitas relatif media percobaan, yang akan berdampak besar pada resonansi plasmon permukaan.29
Pengaruh NaCl dirangkum pada baris tengah Gambar 4. Secara umum dapat disimpulkan bahwa peningkatan konsentrasi natrium klorida mempunyai efek yang sama dengan peningkatan keasaman, karena ion Na+ mempunyai kecenderungan untuk berkoordinasi di sekitar gugus karboksilat, menekan AgNP potensial zeta negatif.Selain itu, 150 mM NaCl menghasilkan agregat berukuran mikron di ketiga sampel, menunjukkan bahwa konsentrasi elektrolit fisiologis merugikan stabilitas koloid AgNP yang diakhiri sitrat.Dengan mempertimbangkan konsentrasi kondensasi kritis (CCC) NaCl pada sistem AgNP yang serupa, hasil ini dapat ditempatkan secara cerdik dalam literatur yang relevan.Huynh dkk.menghitung bahwa CCC NaCl untuk nanopartikel perak diakhiri sitrat dengan diameter rata-rata 71 nm adalah 47,6 mM, sedangkan El Badawy et al.mengamati bahwa CCC AgNP 10 nm dengan lapisan sitrat adalah 70 mM.10,16 Selain itu, CCC yang sangat tinggi sekitar 300 mM diukur oleh He dkk., yang menyebabkan metode sintesisnya berbeda dari publikasi yang disebutkan sebelumnya.48 Meskipun kontribusi saat ini tidak ditujukan pada analisis komprehensif terhadap nilai-nilai ini, karena kondisi eksperimental kami semakin meningkat seiring dengan kompleksitas keseluruhan penelitian, konsentrasi NaCl 50 mM yang relevan secara biologis, khususnya NaCl 150 mM, tampaknya cukup tinggi.Koagulasi terinduksi, menjelaskan perubahan kuat yang terdeteksi.
Langkah selanjutnya dalam percobaan polimerisasi adalah menggunakan molekul sederhana namun relevan secara biologis untuk mensimulasikan interaksi nanopartikel-biomolekul.Berdasarkan hasil DLS (Gambar 6 dan 7) dan UV-Vis (Gambar Tambahan S3 dan S4), beberapa kesimpulan umum dapat ditegaskan.Dalam kondisi eksperimental kami, molekul glukosa dan glutamin yang diteliti tidak akan menginduksi agregasi dalam sistem AgNP mana pun, karena tren rata-rata Z berkaitan erat dengan nilai pengukuran referensi yang sesuai.Meskipun keberadaannya tidak mempengaruhi agregasi, hasil eksperimen menunjukkan bahwa molekul-molekul ini teradsorpsi sebagian pada permukaan AgNP.Hasil paling menonjol yang mendukung pandangan ini adalah perubahan penyerapan cahaya yang diamati.Meskipun AgNP-I tidak menunjukkan perubahan panjang gelombang atau intensitas yang berarti, AgNP-I dapat diamati lebih jelas dengan mengukur partikel yang lebih besar, yang kemungkinan besar disebabkan oleh sensitivitas optik yang lebih besar yang disebutkan sebelumnya.Terlepas dari konsentrasinya, glukosa dapat menyebabkan pergeseran merah yang lebih besar setelah 1,5 jam dibandingkan dengan pengukuran kontrol, yaitu sekitar 40 nm pada AgNP-II dan sekitar 10 nm pada AgNP-III, yang membuktikan terjadinya interaksi permukaan.Glutamin menunjukkan tren serupa, namun perubahannya tidak begitu jelas.Selain itu, perlu juga disebutkan bahwa glutamin dapat mengurangi potensi zeta absolut partikel sedang dan besar.Namun, karena perubahan zeta ini tampaknya tidak mempengaruhi tingkat agregasi, dapat berspekulasi bahwa bahkan biomolekul kecil seperti glutamin dapat memberikan tingkat tolakan spasial antar partikel pada tingkat tertentu.
Gambar 6 Hasil hamburan cahaya dinamis sampel nanopartikel perak terminasi sitrat dengan ukuran yang semakin meningkat (10 nm: AgNP-I, 20 nm: AgNP-II dan 50 nm: AgNP-III) dinyatakan sebagai rata-rata diameter hidrodinamik (Z rata-rata) (kanan) Dalam kondisi eksternal dengan konsentrasi glukosa yang berbeda, potensial zeta (kiri) berubah dalam waktu 24 jam.
Gambar 7 Hasil hamburan cahaya dinamis sampel nanopartikel perak diakhiri sitrat dengan ukuran yang semakin meningkat (10 nm: AgNP-I, 20 nm: AgNP-II dan 50 nm: AgNP-III) dinyatakan sebagai rata-rata diameter hidrodinamik (Z rata-rata ) (kanan) Dengan adanya glutamin, potensial zeta (kiri) berubah dalam waktu 24 jam.
Singkatnya, biomolekul kecil seperti glukosa dan glutamin tidak mempengaruhi stabilitas koloid pada konsentrasi yang diukur: meskipun mempengaruhi potensi zeta dan hasil UV-Vis pada tingkat yang berbeda-beda, hasil rata-rata Z tidak konsisten.Hal ini menunjukkan bahwa adsorpsi permukaan molekul menghambat tolakan elektrostatik, namun pada saat yang sama memberikan stabilitas dimensi.
Untuk menghubungkan hasil sebelumnya dengan hasil sebelumnya dan mensimulasikan kondisi biologis dengan lebih terampil, kami memilih beberapa komponen kultur sel yang paling umum digunakan dan menggunakannya sebagai kondisi eksperimental untuk mempelajari stabilitas koloid AgNP.Dalam keseluruhan percobaan in vitro, salah satu fungsi terpenting DMEM sebagai media adalah untuk menetapkan kondisi osmotik yang diperlukan, tetapi dari sudut pandang kimia, DMEM adalah larutan garam kompleks dengan kekuatan ionik total yang mirip dengan 150 mM NaCl .40 Sedangkan untuk FBS, ini adalah campuran kompleks biomolekul-terutama protein-dari sudut pandang adsorpsi permukaan, ia memiliki beberapa kesamaan dengan hasil eksperimen glukosa dan glutamin, meskipun komposisi dan keragaman kimianya jauh lebih rumit.19 DLS dan UV-Hasil yang terlihat masing-masing ditunjukkan pada Gambar 8 dan Gambar Tambahan S5, dapat dijelaskan dengan memeriksa komposisi kimia bahan-bahan ini dan menghubungkannya dengan pengukuran pada bagian sebelumnya.
Gambar 8 Hasil hamburan cahaya dinamis sampel nanopartikel perak diakhiri sitrat dengan ukuran yang semakin meningkat (10 nm: AgNP-I, 20 nm: AgNP-II dan 50 nm: AgNP-III) dinyatakan sebagai rata-rata diameter hidrodinamik (Z rata-rata ) (kanan) Dengan adanya komponen kultur sel DMEM dan FBS, potensi zeta (kiri) berubah dalam waktu 24 jam.
Pengenceran AgNP dengan ukuran berbeda dalam DMEM memiliki efek serupa pada stabilitas koloid seperti yang diamati pada konsentrasi NaCl yang tinggi.Sebaran AgNP pada DMEM 50 v/v% menunjukkan agregasi skala besar terdeteksi dengan meningkatnya nilai zeta potensial dan nilai rata-rata Z serta penurunan tajam intensitas SPR.Perlu dicatat bahwa ukuran agregat maksimum yang diinduksi oleh DMEM setelah 24 jam berbanding terbalik dengan ukuran nanopartikel primer.
Interaksi antara FBS dan AgNP mirip dengan interaksi yang diamati pada molekul yang lebih kecil seperti glukosa dan glutamin, namun efeknya lebih kuat.Rata-rata Z partikel tetap tidak terpengaruh, sementara peningkatan potensial zeta terdeteksi.Puncak SPR menunjukkan sedikit pergeseran merah, namun mungkin yang lebih menarik, intensitas SPR tidak menurun secara signifikan seperti pada pengukuran kontrol.Hasil ini dapat dijelaskan dengan adsorpsi makromolekul bawaan pada permukaan nanopartikel (baris bawah pada Gambar 4), yang sekarang dipahami sebagai pembentukan mahkota biomolekuler di dalam tubuh.49