Javascript is tans in jou blaaier gedeaktiveer.Wanneer javascript gedeaktiveer is, sal sommige funksies van hierdie webwerf nie werk nie.
Registreer jou spesifieke besonderhede en spesifieke dwelms van belang, en ons sal die inligting wat jy verskaf met artikels in ons uitgebreide databasis pas en betyds vir jou 'n PDF-kopie per e-pos stuur.
Is kleiner nanopartikels altyd beter?Verstaan ​​die biologiese effekte van grootte-afhanklike aggregasie van silwer nanopartikels onder biologies relevante toestande
Skrywers: Bélteky P, Rónavári A, Zakupszky D, Boka E, Igaz N, Szerencsés B, Pfeiffer I, Vágvölgyi C, Kiricsi M, Kónya Z
Péter Bélteky,1,* Andrea Rónavári,1,* Dalma Zakupszky,1 Eszter Boka,1 Nóra Igaz,2 Bettina Szerencsés,3 Ilona Pfeiffer,3 Csaba Vágvölgyi,3 Mónika Kiricsi van Omgewingschemie, Hongarye, Wetenskap en Informatika Fakulteit , Universiteit van Szeged;2 Departement Biochemie en Molekulêre Biologie, Fakulteit Natuurwetenskappe en Inligting, Universiteit van Szeged, Hongarye;3 Departement Mikrobiologie, Fakulteit Natuurwetenskappe en Inligting, Universiteit van Szeged, Hongarye;4MTA-SZTE Reaction Kinetics and Surface Chemistry Research Group, Szeged, Hongarye* Hierdie skrywers het ewe veel tot hierdie werk bygedra.Kommunikasie: Zoltán Kónya Departement Toegepaste en Omgewingschemie, Fakulteit Natuurwetenskappe en Informatika, Universiteit van Szeged, Rerrich Square 1, Szeged, H-6720, Hongarye Telefoon +36 62 544620 E-pos [E-posbeskerming] Doel: Silwer nanopartikels (AgNP's) is een van die nanomateriale wat die meeste bestudeer word, veral as gevolg van hul biomediese toepassings.As gevolg van die samevoeging van nanopartikels word hul uitstekende sitotoksisiteit en antibakteriese aktiwiteit egter dikwels in biologiese media in die gedrang gebring.In hierdie werk is die samevoegingsgedrag en verwante biologiese aktiwiteite van drie verskillende sitraat-getermineerde silwer nanopartikelmonsters met 'n gemiddelde deursnee van 10, 20 en 50 nm bestudeer.Metode: Gebruik transmissie-elektronmikroskoop om nanopartikels te sintetiseer en te karakteriseer, hul aggregasiegedrag by verskeie pH-waardes, NaCl-, glukose- en glutamienkonsentrasies te evalueer deur dinamiese ligverstrooiing en ultraviolet-sigbare spektroskopie.Daarbenewens verbeter komponente soos Dulbecco in die selkultuurmedium die aggregasiegedrag in Eagle Medium en Fetale Kalfserum.Resultate: Die resultate toon dat suur pH en fisiologiese elektrolietinhoud oor die algemeen mikronskaal-aggregasie veroorsaak, wat bemiddel kan word deur die vorming van biomolekulêre korona.Dit is opmerklik dat groter deeltjies hoër weerstand teen eksterne invloede vertoon as hul kleiner eweknieë.In vitro sitotoksisiteit en antibakteriese toetse is uitgevoer deur selle te behandel met nanopartikel aggregate in verskillende aggregasie stadiums.Gevolgtrekking: Ons resultate toon 'n diepgaande korrelasie tussen kolloïdale stabiliteit en die toksisiteit van AgNPs, aangesien uiterste aggregasie lei tot volledige verlies van biologiese aktiwiteit.Die hoër graad van anti-aggregasie wat vir groter deeltjies waargeneem word, het 'n beduidende impak op in vitro toksisiteit, omdat sulke monsters meer antimikrobiese en soogdierselaktiwiteit behou.Hierdie bevindinge lei tot die gevolgtrekking dat, ten spyte van die algemene mening in die relevante literatuur, die teiken van die kleinste moontlike nanopartikels dalk nie die beste manier van aksie is nie.Sleutelwoorde: saad-gemedieerde groei, kolloïdale stabiliteit, grootte-afhanklike aggregasiegedrag, aggregasieskade toksisiteit
Soos die vraag en uitset van nanomateriale aanhou toeneem, word meer en meer aandag aan hul bioveiligheid of biologiese aktiwiteit gegee.Silwer nanopartikels (AgNPs) is een van die mees algemeen gesintetiseerde, nagevorsde en benutte verteenwoordigers van hierdie klas materiale vanweë hul uitstekende katalitiese, optiese en biologiese eienskappe.1 Daar word algemeen geglo dat die unieke eienskappe van nanomateriale (insluitend AgNPs) hoofsaaklik toegeskryf word aan hul groot spesifieke oppervlakte.Daarom is die onvermydelike probleem enige proses wat hierdie sleutelkenmerk beïnvloed, soos deeltjiegrootte, oppervlakbedekking Of aggregasie, of dit die eienskappe van nanopartikels wat van kritieke belang is vir spesifieke toepassings, ernstig sal beskadig.
Die effekte van deeltjiegrootte en stabiliseerders is onderwerpe wat relatief goed in die literatuur gedokumenteer is.Byvoorbeeld, die algemeen aanvaarde siening is dat kleiner nanopartikels giftiger is as groter nanopartikels.2 In ooreenstemming met algemene literatuur, het ons vorige studies die grootte-afhanklike aktiwiteit van nanosilwer op soogdierselle en mikroörganismes getoon.3– 5 Oppervlakbedekking is nog 'n eienskap wat 'n breë invloed op die eienskappe van nanomateriale het.Net deur stabiliseerders op sy oppervlak by te voeg of te wysig, kan dieselfde nanomateriaal heeltemal verskillende fisiese, chemiese en biologiese eienskappe hê.Die toediening van afdekmiddels word meestal uitgevoer as deel van nanopartikelsintese.Sitraat-getermineerde silwer nanopartikels is byvoorbeeld een van die mees relevante AgNP's in die navorsing, wat gesintetiseer word deur silwer soute in 'n geselekteerde stabilisatoroplossing as die reaksiemedium te verminder.6 Sitraat kan maklik voordeel trek uit sy lae koste, beskikbaarheid, bioversoenbaarheid en sterk affiniteit vir silwer, wat weerspieël kan word in verskeie voorgestelde interaksies, van omkeerbare oppervlak-adsorpsie tot ioniese interaksies.Klein molekules en poliatomiese ione naby 7,8, soos sitrate, polimere, poli-elektroliete en biologiese middels word ook algemeen gebruik om nano-silwer te stabiliseer en unieke funksionalisasies daarop uit te voer.9-12
Alhoewel die moontlikheid om die aktiwiteit van nanopartikels te verander deur doelbewuste oppervlakbedekking 'n baie interessante area is, is die hoofrol van hierdie oppervlakbedekking weglaatbaar, wat kolloïdale stabiliteit vir die nanopartikelstelsel verskaf.Die groot spesifieke oppervlakte van nanomateriale sal groot oppervlak-energie produseer, wat die termodinamiese vermoë van die stelsel belemmer om sy minimum energie te bereik.13 Sonder behoorlike stabilisering kan dit lei tot agglomerasie van nanomateriale.Aggregasie is die vorming van aggregate van deeltjies van verskillende vorms en groottes wat plaasvind wanneer verspreide deeltjies ontmoet en huidige termodinamiese interaksies laat die deeltjies aan mekaar kleef.Daarom word stabiliseerders gebruik om aggregasie te voorkom deur 'n voldoende groot afstootkrag tussen die deeltjies in te voer om hul termodinamiese aantrekking teë te werk.14
Alhoewel die onderwerp van deeltjiegrootte en oppervlakbedekking deeglik ondersoek is in die konteks van sy regulering van biologiese aktiwiteite wat deur nanopartikels veroorsaak word, is deeltjieaggregasie 'n grootliks verwaarloosde area.Daar is byna geen deeglike studie om die kolloïdale stabiliteit van nanopartikels onder biologies relevante toestande op te los nie.10,15-17 Daarbenewens is hierdie bydrae besonder skaars, waar die toksisiteit wat met aggregasie geassosieer word ook bestudeer is, selfs al kan dit nadelige reaksies veroorsaak, soos vaskulêre trombose, of verlies van verlangde eienskappe, soos die toksisiteit daarvan, soos getoon in Figuur 1.18, 19 getoon.Trouens, een van die min bekende meganismes van silwer nanopartikelweerstand hou verband met aggregasie, want daar word gerapporteer dat sekere E. coli en Pseudomonas aeruginosa stamme hul nano-silwer sensitiwiteit verminder deur die proteïen flagellien, flagellien, uit te druk.Dit het 'n hoë affiniteit vir silwer, wat sodoende aggregasie veroorsaak.20
Daar is verskeie verskillende meganismes wat verband hou met die toksisiteit van silwer nanopartikels, en aggregasie beïnvloed al hierdie meganismes.Die mees bespreekte metode van AgNP biologiese aktiwiteit, soms na verwys as die "Trojaanse Perd" meganisme, beskou AgNPs as Ag+ draers.1,21 Die Trojaanse perdmeganisme kan 'n groot toename in die plaaslike Ag+ konsentrasie verseker, wat lei tot die generering van ROS en membraandepolarisasie.22-24 Aggregasie kan die vrystelling van Ag+ beïnvloed en sodoende toksisiteit beïnvloed, want dit verminder die effektiewe aktiewe oppervlak waar silwerione geoksideer en opgelos kan word.AgNP's sal egter nie net toksisiteit deur ioonvrystelling toon nie.Baie grootte en morfologie-verwante interaksies moet in ag geneem word.Onder hulle is die grootte en vorm van die nanopartikeloppervlak die bepalende kenmerke.4,25 Die versameling van hierdie meganismes kan gekategoriseer word as "geïnduseerde toksisiteitsmeganismes."Daar is potensieel baie mitochondriale en oppervlakmembraanreaksies wat organelle kan beskadig en seldood kan veroorsaak.25-27 Aangesien die vorming van aggregate natuurlik die grootte en vorm van silwerbevattende voorwerpe beïnvloed wat deur lewende sisteme herken word, kan hierdie interaksies ook beïnvloed word.
In ons vorige referaat oor die samevoeging van silwer nanopartikels, het ons 'n effektiewe siftingsprosedure gedemonstreer wat bestaan ​​uit chemiese en in vitro biologiese eksperimente om hierdie probleem te bestudeer.19 Dinamiese ligverstrooiing (DLS) is die voorkeurtegniek vir hierdie tipe inspeksies omdat die materiaal fotone kan verstrooi op 'n golflengte wat vergelykbaar is met die grootte van sy deeltjies.Aangesien die Brownse bewegingspoed van deeltjies in die vloeistofmedium verband hou met die grootte, kan die verandering in die intensiteit van verstrooide lig gebruik word om die gemiddelde hidrodinamiese deursnee (Z-gemiddeld) van die vloeistofmonster te bepaal.28 Verder, deur 'n spanning op die monster toe te pas, kan die zeta-potensiaal (ζ-potensiaal) van die nanopartikel soortgelyk aan die Z-gemiddelde waarde gemeet word.13,28 Indien die absolute waarde van die zeta-potensiaal hoog genoeg is (volgens algemene riglyne > ±30 mV), sal dit sterk elektrostatiese afstoting tussen die deeltjies genereer om die aggregasie teë te werk.Kenmerkende oppervlak plasmon resonansie (SPR) is 'n unieke optiese verskynsel, hoofsaaklik toegeskryf aan edelmetaal nanopartikels (hoofsaaklik Au en Ag).29​​ Gebaseer op die elektroniese ossillasies (oppervlakplasmone) van hierdie materiale op die nanoskaal, is dit bekend dat sferiese AgNP's 'n kenmerkende UV-Vis-absorpsiepiek naby 400 nm het.30 Die intensiteit en golflengteverskuiwing van die deeltjies word gebruik om die DLS-resultate aan te vul, aangesien hierdie metode gebruik kan word om nanopartikelaggregasie en oppervlakadsorpsie van biomolekules op te spoor.
Gebaseer op die inligting wat verkry is, word sellewensvatbaarheid (MTT) en antibakteriese toetse uitgevoer op 'n wyse waarop AgNP-toksisiteit beskryf word as 'n funksie van aggregasievlak, eerder as (die mees algemeen gebruikte faktor) nanopartikelkonsentrasie.Hierdie unieke metode stel ons in staat om die diepgaande belangrikheid van aggregasievlak in biologiese aktiwiteit te demonstreer, omdat, byvoorbeeld, sitraat-getermineerde AgNPs heeltemal hul biologiese aktiwiteit binne 'n paar uur verloor as gevolg van aggregasie.19
In die huidige werk beoog ons om ons vorige bydraes in die stabiliteit van bio-verwante kolloïede en hul impak op biologiese aktiwiteit grootliks uit te brei deur die effek van nanopartikelgrootte op nanopartikelaggregasie te bestudeer.Dit is ongetwyfeld een van die studies van nanopartikels.'n Hoërprofielperspektief en 31 Om hierdie kwessie te ondersoek, is 'n saadbemiddelde groeimetode gebruik om sitraat-getermineerde AgNP's in drie verskillende groottereekse (10, 20 en 50 nm) te produseer.6,32 as een van die mees algemene metodes.Vir nanomateriale wat wyd en gereeld in mediese toepassings gebruik word, word sitraat-getermineerde AgNP's van verskillende groottes gekies om die moontlike grootte-afhanklikheid van die aggregasie-verwante biologiese eienskappe van nanosilwer te bestudeer.Nadat ons AgNP's van verskillende groottes gesintetiseer het, het ons die vervaardigde monsters deur transmissie-elektronmikroskopie (TEM) gekarakteriseer en dan die deeltjies ondersoek met behulp van die voorgenoemde siftingsprosedure.Daarbenewens, in die teenwoordigheid van in vitro selkulture Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) en Fetal Bovine Serum (FBS), is die grootte-afhanklike aggregasiegedrag en die gedrag daarvan geëvalueer teen verskeie pH-waardes, NaCl, glukose en glutamienkonsentrasies.Die kenmerke van sitotoksisiteit word onder omvattende toestande bepaal.Die wetenskaplike konsensus dui daarop dat in die algemeen kleiner deeltjies verkieslik is;ons ondersoek bied 'n chemiese en biologiese platform om te bepaal of dit die geval is.
Drie silwer nanopartikels met verskillende groottereekse is voorberei deur die saad-gemedieerde groeimetode voorgestel deur Wan et al., met geringe aanpassings.6 Hierdie metode is gebaseer op chemiese reduksie, met behulp van silwernitraat (AgNO3) as die silwerbron, natriumboorhidried (NaBH4) as die reduseermiddel, en natriumsitraat as die stabiliseerder.Berei eers 75 mL van 9 mM sitraat waterige oplossing uit natriumsitraat dihidraat (Na3C6H5O7 x 2H2O) en verhit tot 70°C.Daarna is 2 mL 1% w/v AgNO3-oplossing by die reaksiemedium gevoeg, en dan is die vars voorbereide natriumboorhidriedoplossing (2 mL 0.1% w/v) druppelsgewys in die mengsel gegooi.Die gevolglike geelbruin suspensie is by 70°C gehou met kragtig geroer vir 1 uur, en dan afgekoel tot kamertemperatuur.Die resulterende monster (van nou af na verwys as AgNP-I) word gebruik as die basis vir saadbemiddelde groei in die volgende sintesestap.
Om 'n mediumgrootte deeltjiesuspensie (aangedui as AgNP-II) te sintetiseer, verhit 90 mL 7.6 mM sitraatoplossing tot 80°C, meng dit met 10 mL AgNP-I, en meng dan 2 mL 1% w/v Die AgNO3-oplossing is vir 1 uur onder sterk meganiese roer gehou, en dan is die monster tot kamertemperatuur afgekoel.
Vir die grootste deeltjie (AgNP-III), herhaal dieselfde groeiproses, maar gebruik in hierdie geval 10 ml AgNP-II as die saadsuspensie.Nadat die monsters kamertemperatuur bereik het, stel hulle hul nominale Ag-konsentrasie gebaseer op die totale AgNO3-inhoud op 150 dpm deur bykomende oplosmiddel by 40°C by te voeg of te verdamp, en uiteindelik by 4°C te stoor tot verdere gebruik.
Gebruik FEI Tecnai G2 20 X-Tweelingoordrag-elektronmikroskoop (TEM) (FEI Korporatiewe Hoofkwartier, Hillsboro, Oregon, VSA) met 200 kV-versnellingsspanning om die morfologiese eienskappe van nanopartikels te ondersoek en hul elektrondiffraksiepatroon (ED) vas te vang.Minstens 15 verteenwoordigende beelde (~750 deeltjies) is geëvalueer met behulp van die ImageJ-sagtewarepakket, en die gevolglike histogramme (en alle grafieke in die hele studie) is in OriginPro 2018 (OriginLab, Northampton, MA, VSA) 33, 34 geskep.
Die gemiddelde hidrodinamiese deursnee (Z-gemiddeld), zeta-potensiaal (ζ-potensiaal) en kenmerkende oppervlak plasmon resonansie (SPR) van die monsters is gemeet om hul aanvanklike kolloïdale eienskappe te illustreer.Die gemiddelde hidrodinamiese deursnee en zeta-potensiaal van die monster is gemeet deur die Malvern Zetasizer Nano ZS instrument (Malvern Instruments, Malvern, VK) deur gebruik te maak van weggooibare gevoude kapillêre selle by 37±0.1°C.Ocean Optics 355 DH-2000-BAL UV-Vis-spektrofotometer (Halma PLC, Largo, FL, VSA) is gebruik om kenmerkende SPR-eienskappe te verkry vanaf die UV-Vis-absorpsiespektra van monsters in die reeks van 250-800 nm.
Gedurende die hele eksperiment is drie verskillende metingstipes wat verband hou met kolloïdale stabiliteit gelyktydig uitgevoer.Gebruik DLS om die gemiddelde hidrodinamiese deursnee (Z-gemiddeld) en zeta-potensiaal (ζ-potensiaal) van die deeltjies te meet, want die Z-gemiddelde is verwant aan die gemiddelde grootte van die nanopartikelaggregate, en die zeta-potensiaal dui aan of die elektrostatiese afstoting in die sisteem sterk genoeg is om Van der Waals se aantrekkingskrag tussen nanopartikels te verreken.Metings word in drievoud gemaak, en die standaardafwyking van Z-gemiddelde en zeta-potensiaal word deur Zetasizer-sagteware bereken.Die kenmerkende SPR-spektra van die deeltjies word deur UV-Vis-spektroskopie geëvalueer, want veranderinge in piekintensiteit en golflengte kan aggregasie en oppervlakinteraksies aandui.29,35 Trouens, oppervlakplasmonresonansie in edelmetale is so invloedryk dat dit gelei het tot nuwe metodes van ontleding van biomolekules.29,36,37 Die konsentrasie van AgNPs in die eksperimentele mengsel is ongeveer 10 dpm, en die doel is om die intensiteit van die maksimum aanvanklike SPR-absorpsie op 1 te stel. Die eksperiment is op 'n tydafhanklike wyse by 0 uitgevoer;1,5;3;6;12 en 24 uur onder verskeie biologies relevante toestande.Meer besonderhede wat die eksperiment beskryf, kan in ons vorige werk gesien word.19 Kortom, verskeie pH-waardes (3; 5; 7.2 en 9), verskillende natriumchloried (10 mM; 50 mM; 150 mM), glukose (3.9 mM; 6.7 mM) en glutamien (4 mM) konsentrasies, en het ook Dulbecco se Modified Eagle Medium (DMEM) en Fetal Bovine Serum (FBS) (in water en DMEM) as modelstelsels voorberei, en die uitwerking daarvan op die aggregasiegedrag van die gesintetiseerde silwer nanopartikels bestudeer.pH Die waardes van NaCl, glukose en glutamien word op fisiologiese konsentrasies geëvalueer, terwyl die hoeveelhede DMEM en FBS dieselfde is as die vlakke wat in die hele in vitro-eksperiment gebruik is.38-42 Alle metings is uitgevoer by pH 7.2 en 37°C met 'n konstante agtergrondsoutkonsentrasie van 10 mM NaCl om enige langafstand-deeltjie-interaksies uit te skakel (behalwe vir sekere pH- en NaCl-verwante eksperimente, waar hierdie eienskappe die veranderlikes onder studeer).28 Die lys van verskeie toestande word in Tabel 1 opgesom. Die eksperiment gemerk met † word as verwysing gebruik en stem ooreen met 'n monster wat 10 mM NaCl en pH 7.2 bevat.
Menslike prostaatkankersellyn (DU145) en onsterflike menslike keratinosiete (HaCaT) is verkry vanaf ATCC (Manassas, VA, VSA).Selle word gereeld gekweek in Dulbecco se minimum essensiële medium Eagle (DMEM) wat 4,5 g/L glukose bevat (Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO, VSA), aangevul met 10% FBS, 2 mM L-glutamien, 0,01% streptomisien en 0,005% Penisillien (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, VSA).Die selle word gekweek in 'n 37°C broeikas onder 5% CO2 en 95% humiditeit.
Ten einde die veranderinge in AgNP-sitotoksisiteit wat veroorsaak word deur partikelaggregasie op 'n tydafhanklike wyse te ondersoek, is 'n twee-stap MTT-toets uitgevoer.Eerstens is die lewensvatbaarheid van die twee seltipes gemeet na behandeling met AgNP-I, AgNP-II en AgNP-III.Vir hierdie doel is die twee tipes selle in 96-put plate gesaai teen 'n digtheid van 10 000 selle/put en behandel met drie verskillende groottes silwer nanopartikels in toenemende konsentrasies op die tweede dag.Na 24 uur se behandeling is die selle met PBS gewas en geïnkubeer met 0.5 mg/ml MTT reagens (SERVA, Heidelberg, Duitsland) verdun in kultuurmedium vir 1 uur by 37°C.Formazan-kristalle is opgelos in DMSO (Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO, VSA), en die absorpsie is gemeet by 570 nm met behulp van 'n Synergy HTX plaatleser (BioTek-Hungarye, Budapest, Hongarye).Die absorpsiewaarde van die onbehandelde kontrolemonster word as 100% oorlewingsyfer beskou.Voer ten minste 3 eksperimente uit deur vier onafhanklike biologiese herhalings te gebruik.IC50 word bereken vanaf 'n dosis-responskromme gebaseer op lewenskragresultate.
Daarna, in die tweede stap, deur die deeltjies met 150 mM NaCl vir verskillende tydperke (0, 1,5, 3, 6, 12 en 24 uur) voor selbehandeling te inkubeer, is verskillende samevoegingstoestande van silwer nanopartikels geproduseer.Vervolgens is dieselfde MTT-toets uitgevoer soos voorheen beskryf om veranderinge in sellewensvatbaarheid wat deur partikelaggregasie beïnvloed word, te evalueer.Gebruik GraphPad Prism 7 om die finale resultaat te evalueer, bereken die statistiese betekenisvolheid van die eksperiment deur ongepaarde t-toets, en merk sy vlak as * (p ≤ 0.05), ** (p ≤ 0.01), *** (p ≤ 0.001) ) En **** (p ≤ 0,0001).
Drie verskillende groottes silwer nanopartikels (AgNP-I, AgNP-II en AgNP-III) is gebruik vir antibakteriese vatbaarheid vir Cryptococcus neoformans IFM 5844 (IFM; Navorsingsentrum vir Patogeniese Fungi en Mikrobiese Toksikologie, Chiba Universiteit) en Bacillus Test megaterium SZMC 6031 (SZMC: Szeged Microbiology Collection) en E. coli SZMC 0582 in RPMI 1640 medium (Sigma-Aldrich Co.).Ten einde die veranderinge in antibakteriese aktiwiteit wat veroorsaak word deur die aggregasie van deeltjies te evalueer, is eerstens hul minimum inhiberende konsentrasie (MIC) bepaal deur mikroverdunning in 'n 96-put mikrotiterplaat.Voeg by 50 μL gestandaardiseerde selsuspensie (5 × 104 selle/ml in RPMI 1640-medium), 50 μL silwer nanopartikelsuspensie en verdun twee keer die konsentrasie in serie (in die voorgenoemde medium is die reeks 0 en 75 dpm, dit wil sê, die kontrolemonster bevat 50 μL selsuspensie en 50 μL medium sonder nanopartikels).Daarna is die plaat vir 48 uur by 30°C geïnkubeer, en die optiese digtheid van die kultuur is gemeet by 620 nm met behulp van 'n SPECTROstar Nano-plaatleser (BMG LabTech, Offenburg, Duitsland).Die eksperiment is drie keer in drievoud uitgevoer.
Behalwe dat 50 μL enkel-aggregeerde nanopartikelmonsters op hierdie tydstip gebruik is, is dieselfde prosedure as voorheen beskryf gebruik om die effek van aggregasie op antibakteriese aktiwiteit op die voorgenoemde stamme te ondersoek.Verskillende samevoegingstoestande van silwer nanopartikels word geproduseer deur die deeltjies met 150 mM NaCl vir verskillende tydperke (0, 1,5, 3, 6, 12 en 24 uur) voor selverwerking te inkubeer.’n Suspensie aangevul met 50 μL RPMI 1640-medium is as groeikontrole gebruik, terwyl om toksisiteit te beheer, ’n suspensie met nie-geaggregeerde nanopartikels gebruik is.Die eksperiment is drie keer in drievoud uitgevoer.Gebruik GraphPad Prism 7 om die finale resultaat weer te evalueer, deur dieselfde statistiese analise as die MTT-analise te gebruik.
Die aggregasievlak van die kleinste deeltjies (AgNP-I) is gekarakteriseer, en die resultate is gedeeltelik in ons vorige werk gepubliseer, maar vir 'n beter vergelyking is alle deeltjies deeglik gekeur.Die eksperimentele data word in die volgende afdelings ingesamel en bespreek.Drie groottes van AgNP.19
Metings uitgevoer deur TEM, UV-Vis en DLS het die suksesvolle sintese van alle AgNP monsters geverifieer (Figuur 2A-D).Volgens die eerste ry van Figuur 2 toon die kleinste deeltjie (AgNP-I) 'n eenvormige sferiese morfologie met 'n gemiddelde deursnee van ongeveer 10 nm.Die saadgemedieerde groeimetode voorsien ook AgNP-II en AgNP-III van verskillende groottereekse met gemiddelde partikeldiameters van onderskeidelik ongeveer 20 nm en 50 nm.Volgens die standaardafwyking van die partikelverspreiding oorvleuel die groottes van die drie monsters nie, wat belangrik is vir hul vergelykende analise.Deur die gemiddelde aspekverhouding en dunheidsverhouding van TEM-gebaseerde deeltjie 2D-projeksies te vergelyk, word aanvaar dat die sferisiteit van die deeltjies geëvalueer word deur ImageJ se vormfilterinprop (Figuur 2E).43 Volgens die ontleding van die vorm van deeltjies word hul aspekverhouding (groot sy/kort sy van die kleinste grensreghoek) nie deur deeltjiegroei beïnvloed nie, en hul dunheidsverhouding (gemete oppervlakte van die ooreenstemmende perfekte sirkel/teoretiese oppervlakte ) neem geleidelik af.Dit lei tot meer en meer veelvlakkige deeltjies, wat in teorie perfek rond is, wat ooreenstem met 'n dunheidsverhouding van 1.
Figuur 2 Transmissie-elektronmikroskoop (TEM) beeld (A), elektrondiffraksie (ED) patroon (B), grootte verspreiding histogram (C), kenmerkende ultraviolet-sigbare (UV-Vis) lig absorpsie spektrum (D), en gemiddelde vloeistof Sitraat -getermineerde silwer nanopartikels met meganiese deursnee (Z-gemiddeld), zeta-potensiaal, aspekverhouding en dikteverhouding (E) het drie verskillende groottereekse: AgNP-I is 10 nm (boonste ry), AgNP -II is 20 nm (middelste ry) ), AgNP-III (onderste ry) is 50 nm.
Alhoewel die sikliese aard van die groeimetode die deeltjievorm tot 'n mate beïnvloed het, wat gelei het tot die kleiner sferisiteit van groter AgNPs, het al drie monsters kwasi-sferies gebly.Daarbenewens, soos getoon in die elektrondiffraksiepatroon in Figuur 2B, nano Die kristalliniteit van die deeltjies word nie beïnvloed nie.Die prominente diffraksiering - wat met die (111), (220), (200) en (311) Miller-indekse van silwer gekorreleer kan word - stem baie ooreen met die wetenskaplike literatuur en ons vorige bydraes.9, 19,44 Die fragmentasie van die Debye-Scherrer-ring van AgNP-II en AgNP-III is te wyte aan die feit dat die ED-beeld met dieselfde vergroting vasgevang word, dus soos die deeltjiegrootte toeneem, word die aantal gebuigde deeltjies per eenheidsoppervlakte neem toe en verminder.
Dit is bekend dat die grootte en vorm van nanopartikels biologiese aktiwiteit beïnvloed.3,45 Vormafhanklike katalitiese en biologiese aktiwiteit kan verklaar word deur die feit dat verskillende vorms geneig is om sekere kristalvlakke te vermeerder (met verskillende Miller-indekse), en hierdie kristalvlakke het verskillende aktiwiteite.45,46 Aangesien die voorbereide deeltjies soortgelyke ED-resultate verskaf wat ooreenstem met baie soortgelyke kristalkenmerke, kan dit aanvaar word dat in ons daaropvolgende kolloïdale stabiliteit en biologiese aktiwiteit eksperimente, enige waargenome verskille toegeskryf moet word aan Nanopartikelgrootte, nie vormverwante eienskappe nie.
Die UV-Vis-resultate wat in Figuur 2D opgesom is, beklemtoon verder die oorweldigende sferiese aard van die gesintetiseerde AgNP, omdat die SPR-pieke van al drie monsters rondom 400 nm is, wat 'n kenmerkende waarde van sferiese silwer nanopartikels is.29,30 Die vasgevang spektra het ook die suksesvolle saadgemedieerde groei van nanosilwer bevestig.Soos die deeltjiegrootte toeneem, het die golflengte wat ooreenstem met die maksimum ligabsorpsie van AgNP-II-meer prominent-Volgens die literatuur het AgNP-III 'n rooiverskuiwing ervaar.6,29
Wat die aanvanklike kolloïdale stabiliteit van die AgNP-stelsel betref, is DLS gebruik om die gemiddelde hidrodinamiese deursnee en zeta-potensiaal van die deeltjies by pH 7.2 te meet.Die resultate wat in Figuur 2E uitgebeeld word, toon dat AgNP-III hoër kolloïdale stabiliteit as AgNP-I of AgNP-II het, omdat algemene riglyne aandui dat 'n zeta-potensiaal van 30 mV absoluut nodig is vir langtermyn kolloïdale stabiliteit. Hierdie bevinding word verder ondersteun wanneer die Z-gemiddelde waarde (verkry as die gemiddelde hidrodinamiese deursnee van vrye en saamgevoegde deeltjies) word vergelyk met die primêre deeltjiegrootte wat deur TEM verkry word, want hoe nader die twee waardes is, hoe ligter die graad Versamel in die monster.Trouens, die Z-gemiddelde van AgNP-I en AgNP-II is redelik hoër as hul hoof-TEM-geëvalueerde deeltjiegrootte, dus in vergelyking met AgNP-III, word voorspel dat hierdie monsters meer geneig sal wees om saam te voeg, waar die hoogs negatiewe zeta-potensiaal gaan gepaard met 'n noue grootte Die Z gemiddelde waarde.
Die verklaring vir hierdie verskynsel kan tweeledig wees.Aan die een kant word die sitraatkonsentrasie in alle sintese-stappe op 'n soortgelyke vlak gehandhaaf, wat 'n relatief hoë hoeveelheid gelaaide oppervlakgroepe verskaf om te verhoed dat die spesifieke oppervlakte van die groeiende deeltjies afneem.Volgens Levak et al. kan klein molekules soos sitraat egter maklik deur biomolekules op die oppervlak van die nanopartikels uitgeruil word.In hierdie geval sal die kolloïdale stabiliteit bepaal word deur die korona van die biomolekules wat geproduseer word.31 Omdat hierdie gedrag ook in ons samevoegingsmetings waargeneem is (wat later in meer besonderhede bespreek word), kan sitraatbedekking alleen nie hierdie verskynsel verklaar nie.
Aan die ander kant is die deeltjiegrootte omgekeerd eweredig aan die aggregasie-neiging op die nanometervlak.Dit word hoofsaaklik ondersteun deur die tradisionele Derjaguin-Landau-Verwey-Overbeek (DLVO) metode, waar deeltjie-aantrekking beskryf word as die som van aantrekkings- en afstootkragte tussen deeltjies.Volgens He et al., neem die maksimum waarde van die DLVO-energiekromme af met die grootte van die nanopartikels in die hematiet-nanopartikels, wat dit makliker maak om die minimum primêre energie te bereik, en sodoende onomkeerbare aggregasie (kondensasie) bevorder.47 Daar word egter bespiegel dat daar ander aspekte buite die beperkings van DLVO-teorie is.Alhoewel van der Waals swaartekrag en elektrostatiese dubbellaagafstoting soortgelyk is met toenemende deeltjiegrootte, het 'n resensie deur Hotze et al.stel voor dat dit 'n sterker effek op aggregasie het as wat DLVO toelaat.14 Hulle glo dat die oppervlakkromming van nanopartikels nie meer as 'n plat oppervlak geskat kan word nie, wat wiskundige skatting ontoepasbaar maak.Daarbenewens, soos die deeltjiegrootte afneem, word die persentasie atome teenwoordig op die oppervlak hoër, wat lei tot elektroniese struktuur en oppervlakladingsgedrag.En oppervlakreaktiwiteit verander, wat kan lei tot 'n afname in die lading in die elektriese dubbellaag en aggregasie bevorder.
Toe ons die DLS-resultate van AgNP-I, AgNP-II en AgNP-III in Figuur 3 vergelyk het, het ons opgemerk dat al drie monsters soortgelyke pH-aansporende aggregasie getoon het.'n Swaar suur omgewing (pH 3) skuif die zeta potensiaal van die monster na 0 mV, wat veroorsaak dat deeltjies mikrongrootte aggregate vorm, terwyl alkaliese pH sy zeta potensiaal na 'n groter negatiewe waarde verskuif, waar die deeltjies kleiner aggregate vorm (pH 5) ).En 7.2) ), of bly heeltemal ongeaggregeerd (pH 9).Enkele belangrike verskille tussen die verskillende monsters is ook waargeneem.Regdeur die eksperiment het AgNP-I geblyk die sensitiefste te wees vir pH-geïnduseerde zeta-potensiaalveranderinge, omdat die zeta-potensiaal van hierdie deeltjies verminder is teen pH 7.2 in vergelyking met pH 9, terwyl AgNP-II en AgNP-III slegs A getoon het. aansienlike verandering in ζ is rondom pH 3. Daarbenewens het AgNP-II stadiger veranderinge en matige zeta-potensiaal getoon, terwyl AgNP-III die mildste gedrag van die drie getoon het, omdat die stelsel die hoogste absolute zeta-waarde en stadige tendensbeweging getoon het, wat aandui AgNP-III Mees bestand teen pH-geïnduseerde aggregasie.Hierdie resultate stem ooreen met die gemiddelde hidrodinamiese deursnee metingsresultate.Met inagneming van die deeltjiegrootte van hul primers, het AgNP-I konstante geleidelike aggregasie by alle pH-waardes getoon, heel waarskynlik as gevolg van die 10 mM NaCl agtergrond, terwyl AgNP-II en AgNP-III slegs betekenisvol getoon het by pH 3 van versameling.Die interessantste verskil is dat, ten spyte van sy groot nanopartikelgrootte, AgNP-III die kleinste aggregate by pH 3 in 24 uur vorm, wat sy anti-aggregasie eienskappe beklemtoon.Deur die gemiddelde Z van AgNP's by pH 3 na 24 uur te deel deur die waarde van die voorbereide monster, kan waargeneem word dat die relatiewe totale groottes van AgNP-I en AgNP-II met 50 keer, 42 keer en 22 keer toegeneem het , onderskeidelik.III.
Figuur 3 Die dinamiese ligverstrooiingsresultate van die sitraat-getermineerde silwer nanopartikelmonster met toenemende grootte (10 nm: AgNP-I, 20 nm: AgNP-II en 50 nm: AgNP-III) word uitgedruk as die gemiddelde hidrodinamiese deursnee (Z-gemiddeld) ) (regs) Onder verskillende pH-toestande verander die zeta-potensiaal (links) binne 24 uur.
Die waargenome pH-afhanklike aggregasie het ook die kenmerkende oppervlak plasmon resonansie (SPR) van die AgNP monsters beïnvloed, soos blyk uit hul UV-Vis spektra.Volgens Aanvullende Figuur S1 word die samevoeging van al drie silwer nanopartikelsuspensies gevolg deur 'n vermindering in die intensiteit van hul SPR-pieke en 'n matige rooi verskuiwing.Die omvang van hierdie veranderinge as 'n funksie van pH stem ooreen met die mate van aggregasie wat deur die DLS resultate voorspel word, maar 'n paar interessante neigings is waargeneem.In teenstelling met intuïsie, blyk dit dat die mediumgrootte AgNP-II die sensitiefste is vir SPR-veranderinge, terwyl die ander twee monsters minder sensitief is.In SPR-navorsing is 50 nm die teoretiese deeltjiegroottelimiet, wat gebruik word om deeltjies te onderskei op grond van hul diëlektriese eienskappe.Deeltjies kleiner as 50 nm (AgNP-I en AgNP-II) kan beskryf word as eenvoudige diëlektriese dipole, terwyl deeltjies wat hierdie limiet (AgNP-III) bereik of oorskry, meer komplekse diëlektriese eienskappe het, en hul resonansie Die band verdeel in multimodale veranderinge .In die geval van twee kleiner deeltjiemonsters, kan AgNPs as eenvoudige dipole beskou word, en die plasma kan maklik oorvleuel.Soos die deeltjiegrootte toeneem, produseer hierdie koppeling in wese 'n groter plasma, wat die hoër sensitiwiteit wat waargeneem is, kan verklaar.29 Vir die grootste deeltjies is die eenvoudige dipoolskatting egter nie geldig wanneer ander koppelingstoestande ook kan voorkom nie, wat die verminderde neiging van AgNP-III om spektrale veranderinge aan te dui, kan verklaar.29
Onder ons eksperimentele toestande is dit bewys dat die pH-waarde 'n diepgaande effek het op die kolloïdale stabiliteit van sitraat-bedekte silwer nanopartikels van verskillende groottes.In hierdie stelsels word stabiliteit verskaf deur die negatief gelaaide -COO- groepe op die oppervlak van AgNPs.Die karboksilaat funksionele groep van die sitrasie ioon word in 'n groot aantal H+ ione geprotoneer, dus kan die gegenereerde karboksielgroep nie meer elektrostatiese afstoting tussen die deeltjies verskaf nie, soos in die boonste ry van Figuur 4 getoon. Volgens Le Chatelier se beginsel, AgNP monsters aggreer vinnig by pH 3, maar word geleidelik meer en meer stabiel soos die pH toeneem.
Figuur 4 Skematiese meganisme van oppervlakinteraksie gedefinieer deur aggregasie onder verskillende pH (boonste ry), NaCl-konsentrasie (middelste ry) en biomolekules (onderste ry).
Volgens Figuur 5 is die kolloïdale stabiliteit in AgNP-suspensies van verskillende groottes ook ondersoek onder toenemende soutkonsentrasies.Op grond van die zeta-potensiaal bied die verhoogde nanopartikelgrootte in hierdie sitraat-getermineerde AgNP-stelsels weer verhoogde weerstand teen eksterne invloede van NaCl.In AgNP-I is 10 mM NaCl voldoende om ligte aggregasie te veroorsaak, en 'n soutkonsentrasie van 50 mM lewer baie soortgelyke resultate.In AgNP-II en AgNP-III beïnvloed 10 mM NaCl nie die zeta-potensiaal beduidend nie omdat hul waardes op (AgNP-II) of onder (AgNP-III) -30 mV bly.Die verhoging van die NaCl-konsentrasie na 50 mM en uiteindelik tot 150 mM NaCl is genoeg om die absolute waarde van die zeta-potensiaal in alle monsters aansienlik te verminder, alhoewel groter deeltjies meer negatiewe lading behou.Hierdie resultate stem ooreen met die verwagte gemiddelde hidrodinamiese deursnee van AgNPs;die Z gemiddelde tendenslyne gemeet op 10, 50 en 150 mM NaCl toon verskillende, geleidelik toenemende waardes.Laastens is mikrongrootte aggregate in al drie 150 mM eksperimente opgespoor.
Figuur 5 Die dinamiese ligverstrooiingsresultate van die sitraat-getermineerde silwer nanopartikelmonster met toenemende grootte (10 nm: AgNP-I, 20 nm: AgNP-II en 50 nm: AgNP-III) word uitgedruk as die gemiddelde hidrodinamiese deursnee (Z-gemiddelde) ) (regs) en zeta-potensiaal (links) verander binne 24 uur onder verskillende NaCl-konsentrasies.
Die UV-Vis resultate in Aanvullende Figuur S2 toon dat die SPR van 50 en 150 mM NaCl in al drie monsters 'n oombliklike en betekenisvolle afname het.Dit kan deur DLS verklaar word, want NaCl-gebaseerde aggregasie vind vinniger plaas as pH-afhanklike eksperimente, wat verklaar word deur die groot verskil tussen die vroeë (0, 1,5 en 3 uur) metings.Daarbenewens sal die verhoging van die soutkonsentrasie ook die relatiewe permittiwiteit van die eksperimentele medium verhoog, wat 'n diepgaande effek op oppervlakplasmonresonansie sal hê.29
Die effek van NaCl word opgesom in die middelste ry van Figuur 4. Oor die algemeen kan die gevolgtrekking gemaak word dat die verhoging van die konsentrasie van natriumchloried 'n soortgelyke effek het as die verhoging van die suurheid, omdat Na+ ione 'n neiging het om rondom die karboksilaatgroepe te koördineer, onderdrukking van negatiewe zeta potensiële AgNPs.Daarbenewens het 150 mM NaCl mikrongrootte aggregate in al drie monsters geproduseer, wat aandui dat die fisiologiese elektrolietkonsentrasie nadelig is vir die kolloïdale stabiliteit van sitraat-getermineerde AgNPs.Deur die kritiese kondenserende konsentrasie (CCC) van NaCl op soortgelyke AgNP-stelsels in ag te neem, kan hierdie resultate slim in die relevante literatuur geplaas word.Huynh et al.bereken dat die CCC van NaCl vir sitraat-getermineerde silwer nanopartikels met 'n gemiddelde deursnee van 71 nm 47.6 mM was, terwyl El Badawy et al.waargeneem dat die CCC van 10 nm AgNPs met sitraatbedekking 70 mM was.10,16 Daarbenewens is die aansienlik hoë CCC van ongeveer 300 mM deur He et al. gemeet, wat veroorsaak het dat hul sintesemetode verskil van die voorheen genoemde publikasie.48 Alhoewel die huidige bydrae nie gemik is op 'n omvattende ontleding van hierdie waardes nie, omdat ons eksperimentele toestande toeneem in die kompleksiteit van die hele studie, blyk die biologies relevante NaCl-konsentrasie van 50 mM, veral 150 mM NaCl, redelik hoog te wees.Geïnduseerde koagulasie, wat die sterk veranderinge wat opgespoor is, verduidelik.
Die volgende stap in die polimerisasie-eksperiment is om eenvoudige maar biologies relevante molekules te gebruik om nanopartikel-biomolekule-interaksies te simuleer.Gebaseer op DLS (Figure 6 en 7) en UV-Vis resultate (Aanvullende Figure S3 en S4), kan 'n paar algemene gevolgtrekkings beweer word.Onder ons eksperimentele toestande sal die bestudeerde molekules glukose en glutamien nie aggregasie in enige AgNP-stelsel veroorsaak nie, want die Z-gemiddelde neiging is nou verwant aan die ooreenstemmende verwysingsmetingswaarde.Alhoewel hul teenwoordigheid nie aggregasie beïnvloed nie, toon eksperimentele resultate dat hierdie molekules gedeeltelik op die oppervlak van AgNPs geadsorbeer word.Die mees prominente resultaat wat hierdie siening ondersteun, is die waargenome verandering in ligabsorpsie.Alhoewel AgNP-I nie betekenisvolle golflengte- of intensiteitsveranderinge toon nie, kan dit duideliker waargeneem word deur groter deeltjies te meet, wat heel waarskynlik te wyte is aan die groter optiese sensitiwiteit wat vroeër genoem is.Ongeag die konsentrasie, kan glukose 'n groter rooiverskuiwing na 1,5 uur veroorsaak in vergelyking met die kontrolemeting, wat ongeveer 40 nm in AgNP-II en ongeveer 10 nm in AgNP-III is, wat die voorkoms van oppervlakinteraksies bewys.Glutamien het 'n soortgelyke neiging getoon, maar die verandering was nie so duidelik nie.Daarbenewens is dit ook die moeite werd om te noem dat glutamien die absolute zeta-potensiaal van medium en groot deeltjies kan verminder.Aangesien hierdie zeta-veranderinge egter nie die aggregasievlak affekteer nie, kan daar gespekuleer word dat selfs klein biomolekules soos glutamien 'n sekere mate van ruimtelike afstoting tussen deeltjies kan verskaf.
Figuur 6 Die dinamiese ligverstrooiingsresultate van sitraat-getermineerde silwer nanopartikelmonsters met toenemende grootte (10 nm: AgNP-I, 20 nm: AgNP-II en 50 nm: AgNP-III) word uitgedruk as die gemiddelde hidrodinamiese deursnee (Z-gemiddeld) (regs) Onder eksterne toestande van verskillende glukosekonsentrasies verander die zeta-potensiaal (links) binne 24 uur.
Figuur 7 Die dinamiese ligverstrooiingsresultate van die sitraat-getermineerde silwer nanopartikelmonster met toenemende grootte (10 nm: AgNP-I, 20 nm: AgNP-II en 50 nm: AgNP-III) word uitgedruk as die gemiddelde hidrodinamiese deursnee (Z-gemiddelde) ) (regs) In die teenwoordigheid van glutamien verander die zeta-potensiaal (links) binne 24 uur.
Kortom, klein biomolekules soos glukose en glutamien beïnvloed nie kolloïdale stabiliteit by die gemete konsentrasie nie: alhoewel hulle die zeta-potensiaal en UV-Vis-resultate in verskillende grade beïnvloed, is die Z-gemiddelde resultate nie konsekwent nie.Dit dui daarop dat die oppervlakadsorpsie van molekules elektrostatiese afstoting inhibeer, maar terselfdertyd dimensionele stabiliteit verskaf.
Om die vorige resultate met die vorige resultate te koppel en biologiese toestande meer vaardig te simuleer, het ons van die mees gebruikte selkultuurkomponente gekies en dit as eksperimentele toestande gebruik om die stabiliteit van AgNP-kolloïede te bestudeer.In die hele in vitro eksperiment is een van die belangrikste funksies van DMEM as medium om die nodige osmotiese toestande daar te stel, maar vanuit 'n chemiese oogpunt is dit 'n komplekse soutoplossing met 'n totale ioniese sterkte soortgelyk aan 150 mM NaCl .40 Wat FBS betref, is dit 'n komplekse mengsel van biomolekules - hoofsaaklik proteïene - uit die oogpunt van oppervlakadsorpsie het dit 'n paar ooreenkomste met die eksperimentele resultate van glukose en glutamien, ten spyte van die chemiese samestelling en diversiteit Seks is baie meer ingewikkeld.19 DLS en UV-Die sigbare resultate wat onderskeidelik in Figuur 8 en Aanvullende Figuur S5 getoon word, kan verduidelik word deur die chemiese samestelling van hierdie materiale te ondersoek en dit met die metings in die vorige afdeling te korreleer.
Figuur 8 Die dinamiese ligverstrooiingsresultate van die sitraat-getermineerde silwer nanopartikelmonster met toenemende grootte (10 nm: AgNP-I, 20 nm: AgNP-II en 50 nm: AgNP-III) word uitgedruk as die gemiddelde hidrodinamiese deursnee (Z-gemiddelde) ) (regs) In die teenwoordigheid van selkultuurkomponente DMEM en FBS, verander zetapotensiaal (links) binne 24 uur.
Die verdunning van AgNPs van verskillende groottes in DMEM het 'n soortgelyke effek op kolloïdale stabiliteit as wat waargeneem word in die teenwoordigheid van hoë NaCl konsentrasies.Die verspreiding van AgNP in 50 v/v% DMEM het getoon dat grootskaalse aggregasie opgespoor is met die toename van zeta potensiaal en Z-gemiddelde waarde en die skerp afname in SPR intensiteit.Dit is opmerklik dat die maksimum totale grootte wat deur DMEM na 24 uur geïnduseer word omgekeerd eweredig is aan die grootte van primer nanopartikels.
Die interaksie tussen FBS en AgNP is soortgelyk aan dié wat waargeneem word in die teenwoordigheid van kleiner molekules soos glukose en glutamien, maar die effek is sterker.Die Z-gemiddelde van die deeltjies bly onaangeraak, terwyl 'n toename in zeta-potensiaal bespeur word.Die SPR-piek het 'n effense rooi verskuiwing getoon, maar miskien meer interessant, die SPR-intensiteit het nie so beduidend afgeneem soos in die kontrolemeting nie.Hierdie resultate kan verklaar word deur die aangebore adsorpsie van makromolekules op die oppervlak van nanopartikels (onderste ry in Figuur 4), wat nou verstaan ​​word as die vorming van biomolekulêre korona in die liggaam.49